واكسني براي كنترل Clostridium perfringens در حيوانات و خصوصاً انتريت نكروتيك در طيور تهيه شده است. اختراع حاضر توسعه و توليد واكسن طيور مي باشد كه مشتمل بر يك پروتئين آنتي ژنيك واحد كه از دومين آنتي ژنيك انتهاي كربوكسي آنتي ژنيك پروتئين آلفا توكسين كه با يك رابط پپتيدي آلفا هليكال به دومين آنتي ژنيك انتهاي كربوكسي پروتئين NetB متصل مي گردد، همچنين اين دو واحد بوسيله يك رابط پپتيدي آلفا هليكال به جايگاه فعال پروتئين متالوپپتيداز روي متصل مي گردند.اختراع ارائه شده يك سلول گياهي شامل پروتئين هاي آنتي ژنيك توصيف شده، نوكلئيك اسيد توصيف شده، كاست بياني توصيف شده و يا وكتور نوتركيب توصيف شده مي باشد.اختراع حاضر واكسني را ارائه ميدهدكه اين واكسن در تحريك سيستم ايمني همورال در پاسخ به باكتري C . perfringens و محافظت در برابر بيماري نكروتيك انتريتيس به طور موثري تاثير گزار مي باشد. روش هاي توليد و واكسيناسيون طيور نيز فراهم اورده شده است

به منظور ايجاد تغييرات و رسيدن به پروموتري قوي و غير حساس به عوامل مهاري دخيل در پديده مهار كاتابوليتي، با استفاده از تكنيك PCR در دو ناحيه، كه احتمال داده مي شد يكي توالي متصل شونده به سيگما فاكتور و ديگري ناحيه cre باشد، جهش ايجاد شد. به منظور بررسي دقيق اثر اين جهش هاي هدف دار نياز به وجود يك ژن گزارشگر بود. بدين منظور از ژن كيتيناز chiS استفاده شد. دليل استفاده از اين ژن به علت وجود آنتي بادي بر عليه اين پروتئين و امكان انجام تكنيك وسترن بلاتينگ از يك سو و نيز بررسي فعاليت آنزيمي از سوي ديگر بود. به علاوه، اين ژن بيان بيشتري نسبت به chil داشته و بنابراين به راحتي براي بررسي پروموتر طبيعي و دستكاري نشده قابل استفاده خواهد بود. در مرحله بعدي كار، دو پروموتر تغيير يافته از طريق SOEing PCR به ژن chiS متصل شدند. ژن chiS نيز به همراه پروموتر طبيعي و با استفاده از الگوي ژنومي و تكنيك PCR تكثير شدند. بدين ترتيب سه قطعه ژني متفاوت ساخته شد: قطعه ژني حاوي ژن كيتيناز و ناحيه پروموتري دست نخورده (Upchi2)، ژن كيتيناز متصل به پروموتري كه ۳۴۲ جفت باز از آن حذف شده است( Upchil) وزن كيتيناز متصل به پروموتري فاقد ناحيه cre و ۲۶ جفت باز از بالادست آن (Upchi2Acresig) (شكل3) پس از تكثير قطعات مورد نظر، اين قطعات در ناقل پلاسميدي pDHAFB كلون شدند. شكل ۴ نشان دهنده نقشه اين پلاسميد است. از جمله ويژگي هاي اين پلاسميد وجود دو ماركر انتخابي آنتي بيوتيكي، آمپي سيلين براي E. coli و كلرامفنيكل براي Bacillus subtilis ، است. همچنين، اين وكتور پلاسميدي قابليت ورود به ژنوم در ناحيه ژن آميلاز، يك ژن غير ضروري را دارد كه اين خود عاملي در جهت پايداري ژن هترولوگ مورد نظر و عدم نياز به استفاده مداوم از آنتي بيوتيك جهت حفظ پلاسميد بود.

خلاصه‌اي از توصيف اختراع: امروزه يكي از بهترين راههاي خالص سازي پروتئينها، كلونسازي و اضافه كردن دنباله اي شامل 6 اسيد آمينه هيستيدين در ساختار آنها و بيان آنها بصورت نوتركيب در آزمايشگاه ميباشد. در اين صورت خالص سازي آنها ساده تر ميگردد. در اين فرايند ابتدا جداسازي پرتئين مورد نظر با استفاده از رزينهايي كه به صورت انتخابي اين نوع پروتئنها را جذب خود ميكند انجام شده و در مراحل بعدي با شستشوي رزين پروتئينهايي كه بطور غير اختصاصي به آن متصل شده اند شسته شده و پروتئين مورد نظر تخليص ميشود. در تحقيقات انجام شده نوعي رزين تخليص پروتئين بر مبناي بستر سيليكا توليد و مورد ارزيابي قرار گرفته است. براي تهيه اين رزين ابتدا ذرات سيليكاي خشك با گروههاي اپوكسي عاملدار گشته و سپس تمامي گروههاي اپوكسي توسط تركيب "ايمينو داي استيك اسيد" مورد اصلاح قرار گرفتند. در ادامه كاتيونهاي دو ظرفيتي مس با استفاده از تركيب سولفات مس جهت كئوردينه شدن با دنباله هيستيديني پروتئينها وارد ساختار بستر گرديدند.

پروتئين A باكتري S. aureus (SpA) يك پروتئين سطحي 60-40 كيلو دالتوني است كه به دليل اتصال به ناحيه Fc ايمونوگلوبين ها، توانايي جذب اختصاصي آنها را از ميان ساير پروتئين ها دارد و بدين ترتيب جايگاه مهمي را در تحقيقات بيوشيميايي و بيوتكنولوژي پيدا كرده است. از تثبيت پروتئين A بر روي سطوح جامد مي توان محصولي توليد كرد كه قابليت جداسازي IgG را از مخلوط پروتئيني سرم در يك محيط مايع داشته باشد. از اتصال اين پروتئين به آنتي¬باديهاي اختصاصي مي توان براي خالص سازي پروتئينها نيز استفاده كرد. در اين نوآوري سعي شده است با اتصال سطحي پروتئين A به سطح باكتري B. subtilis تركيبي بيوتكنولوژيك ارائه شود كه جهت خالص سازي آنتي باديها و پروتئينها مورد استفاده قرار گيرد. براي اين منظور سازه اي طراحي گرديد كه شامل ژنهاي مربوط به سيگنال پپتيد، spa، موتيف اتصال به ديواره و ژن سورتاز مي باشد. بيان ژنتيكي پروتئين A همزمان با آنزيم سورتاز باعث نمايش اين پروتئين بر روي سطح سلول رويشي باكتري B. subtilis مي شود و بدين ترتيب سلول هاي باكتري به عنوان ذرات جاذب ايمنوگلوبولين ها عمل مي كنند.

خلاصه‌اي از توصيف اختراع: يكي از بهترين روش ها، جهت تخليص پروتئين ها ، كلون كردن و افزودن دنباله اي مناسب همچون گلوتاتيون اس ترانسفراز در ساختار پروتئين ها وبيان آنها به صورت نوتركيب مي باشد.استفاده از دنباله سبب تسهيل در تخليص پروتئين ها درآزمايشگاه مي شود. در خالص سازي پروتئين هاي داراي دنباله به بستر متصل شده و طي مراحل شست وشو پروتئين هايي كه به صورت غير اختصاصي متصل شده اند از بستر جدا مي شوند.با افزودن بافر استخراج پروتئين مورد نظر خالص مي شود. طي تحقيقات انجام شده بستر مناسب براي خالص سازي پروتئين ها ساخته و مورد ارزيابي قرار گرفته است. براي ساخت رزين، وابتدا سيليكا با گروه هاي عاملي \\\\\\"تيول\\\\\\" عامل دار شده و سپس گروههاي مركاپتو بوسيله لينكر 2,2′-Dithiodipyridine مورد اصلاح قرار گرفته اند. ماده گلوتاتيون در مرحله بعدي به عامل هاي روي سطح بستر سيليكا متصل مي شوند. از بستر براي تخليص پروتئين هايي با دنباله گلوتاتيون اس ترانسفراز استفاده مي¬شود.

خلاصه: قسمت اول فرايند فوق شامل يك بخش جهت ورود پروتئوم مورد نظر محقق براي جستجو در آن مي باشدكه شامل بخشي جهت دريافت موتيف يا دومين مورد نظر و جستجو گر براي يافتن پروتئين مورد نظر داراي موتيف يا دومين مورد نظر مي باشد، كه پس از جستجو پروتئين هاي مربوطه در جدولي ارائه خواهند شد . در قسمت دوم فرايند يك بخش ورود نام لاكتوباسيلوس مورد نظر جهت فراخواني نوع خاصي از پروتئين ها بنام پروتئين هاي وابسته به سورتاز SDPs موجود درآن باكتري از بانك داده ي فرايند موجود مي باشد . كه پس از جستجوي بانك داده، SDP هاي موجود در لاكتوباسيلوس مد نظر همراه با اطلاعاتي شامل كد شناسايي پروتئين و نام پروتئين و تعداد كل اسيد هاي آمينه موجود در آن ارائه داده خواهند شد .